С-Реактивный белок (СРБ)
ПРИНЦИП МЕТОДАСывороточный С-реактивный белок (СРБ) в концентрации 6 мг/л и выше вызывает видимую агглютинацию на слайде в суспензии латексных частиц покрытых антителами против С-реактивного белка человека 1/2.
СОСТАВ
А. Реагент. Суспензия латексных частиц покрытых антителами против СРБ человека, азид натрия 0,95 г/л.
С+ Положительный контроль. Сыворотка человека, содержащая СРБ выше 6 мг/л
С- Отрицательный контроль. Сыворотка, содержащая СРБ менее 6 мг/л.
Компоненты человеческого происхождения были проверены на отсутствие антител к HIV и HCV, а также и к Hbs – антигену. Однако следует проявлять осторожность при работе с реагентами, как потенциальным источником инфекций.
ХРАНЕНИЕ
Хранить компоненты при 2-8С, исключая карточки и мешалки, которые могут храниться при комнатной температуре.
Реагенты и Контроли стабильны до срока годности, указанного на этикетке флаконов, при хранении плотно закрытыми и избежании загрязнения во время использования.
Показатели загрязнения:
Реагент: Видимая агглютинация во флаконе
Контроли: Присутствие взвешенных частиц.
ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ Механический смеситель, до 100 об/мин
ОБРАЗЦЫ
Сыворотка, собранная по стандартной процедуре. Стабильность составляет 48 часов при 2-8° C.
ПРОЦЕДУРА
1.Нагреть реагенты и образцы до комнатной температуры (примечание 2).
2.Поместить 50 мкл образца и 1 каплю каждого Контроля в лунки на слайде.
3.Осторожно перемешать флакон с латексом (А). Держа флакон вертикально осторожно добавить 1 каплю реагента А в каждую лунку рядом с образцом.
4.Перемешать одноразовой мешалкой и распределить по всей поверхности, ограниченной кольцом. Использовать новую мешалку для каждого образца.
5.Поставить слайды в ротатор на 100 об/мин на 2 минуты.
ЧТЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
Проверить визуально слайды после смешивания (удаления из ротатора) в течение одной минуты на наличие или отсутствие агглютинации. (примечание 3).
Положительные результаты: Присутствие видимой агглютинации выявляется при содержании СРБ ?6 мг/л. Сыворотку, показавшую положительный результат, можно оттитровать. Для этого сделать двухкратные разведения с 9 г/л физиологическим раствором. Самое большое разведение сыворотки, показавшее положительный результат, является титром сыворотки, в которой приблизительный уровень СРБ можно рассчитать, умножив титр сыворотки на предел чувствительности (6 мг/л).
Отрицательные результаты: Отсутствие видимой агглютинации, выявляется при содержании СРБ в сыворотке ниже 6 мг/л.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Положительный С+ и отрицательный С- контроли, поставляемые в наборе, должны тестироваться совместно с образцами пациентов для верификации процедуры.
Положительный контроль С+ показывает ясно видимую агглютинацию латексных частиц.
Отрицательный контроль С- не вызывает агглютинации латексных частиц.
Каждая лаборатория должна устанавливать собственные схемы внутреннего контроля качества и вносить коррективы в случае, если контроль качества не укладывается в допустимые пределы.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Предел определения: 6 мг/л СРБ, при использовании внутреннего стандарта, прослеженного по Стандартному референсному материалу BCR 470 (Институт референсных материалов и измерений , IRMM). Величина cut-off может варьировать до 25% в зависимости от неконтролируемых вариаций измерительной процедуры и опыта оператора в учете результатов.
Эффект высокой дозы (эффект зоны): Ложно отрицательные результаты отсутствуют, по меньшей мере до значений концентрации 205 мг/л СРБ. Ложные результаты: Результаты, полученные с данными реагентами не показывают значительных различий при сравнении с референсными реагентами. Детали эксперимента предоставляются по запросу.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
С-реактивный белок (СРБ) синтезируется в печени и является одним из наиболее чувствительных белков острой фазы при повреждении тканей или воспалении. СРБ активирует классический путь активации комплемента, как ответ на воспалительную реакцию.
Уровни СРБ в плазме могут значительно повышаться при инфаркте миокарда, стрессе, травмах, инфекциях, воспалении, хирургических вмешательствах или в
случае неопластической пролиферации. Повышение уровня СРБ возникает в промежутке от 24 до 48 часов, уровень СРБ может увеличиваться в 2000 раз по
сравнению с нормой. Подъем уровня СРБ теоретически ожидается при любом
заболевании, связанном с повреждением тканей и является неспецифическим.
Клинический диагноз не должен основываться только на данных единичного теста, а должен включать в себя как клинические, так и лабораторные данные.
ПРИМЕЧАНИЕ
1.Слайды, которые могут использоваться повторно, должны быть тщательно промыты проточной и дистиллированной водой, свободной от всех детергентов.
2.Чувствительность теста может уменьшиться при снижении температуры.
3.Задержка в чтении результатов может привести к ложноположительным результатам.
