Фебрильные тесты
ПРИНЦИП МЕТОДА
Фиксированные бактериальные антигены являются стандартизированной суспензией приготовленных бактерий, для быстрого полуколичественного определения уровня антител в сыворотке при некоторых фебрильных инфекциях, таких, как бруцеллез, сальмонеллез и рикеттсиоз. Агглютинация происходит при наличии в сыворотке антигена и соответствующих гомологичных антител.
СОСТАВ НАБОРА ДЛЯ МУЛЬТИСКРИННИНГА
33001 B. abortus Rose Bengal, фиксированные, 5 мл (только слайд-тесты). S. typhi H (d-H) 5 мл, S. typhi O (9,12-O), 5 мл. S. paratyphi AH (a-H) 5 мл. S.paratyphi BH (b-H) 5 мл. Proteus OX19 5 мл. Polivalent Positive Control 1 мл. Polivalent Negative Control 1 мл.
ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ
Стеклянные слайды для агглютинации в слайд-тестах
Механический ротатор со скоростью вращения 100 об/мин
Термобаня на 37° С.
ОБРАЗЦЫ
Сыворотка. Стабильность составляет 7 дней при 2-8° С.
Гемолизированная и липемическая сыворотка не подходит для тестирования.
МЕТОДИКА
А. АГГЛЮТИНАЦИЯ НА СЛАЙДАХ
1.Подогреть реагенты и образцы до комнатной температуры (примечание 1)
2.Поместить 1 каплю (50 мкл) образца (примечание 2 и 3) и 1 каплю каждого Контроля (примечание 4) в лунку на стеклянном слайде.
3.Осторожно перемешать флакон с антигеном перед использованием. Добавить 1 каплю суспензии антигена в каждую лунку следом за образцом.
4.Перемешать одноразовой мешалкой и размазать по всей поверхности лунки. Использовать для каждого образца новые мешалки.
5.Поместить слайд в ручной или механический ротатор при 100 об/мин (примечание 5):
Жгутиковые и соматические антигены – 2 минуты
B.Rose Bengal – 4 минуты
В. АГГЛЮТИНАЦИЯ В ПРОБИРКАХ
1.Развести сыворотку 1/20 физиологическим раствором (0,1 мл сыворотки + 1,9 мл физ.раствора) и сделать серии с двух-кратным шагом с разведением с физиологическим раствором.
2.Развести Положительные и Отрицательный Контроли 1/10 физиологическим раствором (0,1 мл Контроля + 0,9 мл физиологического раствора).
3.Приготовить каждый антиген для тестирования ряд пробирок содержащих 1 мл каждого, как описано ниже: физиологический раствор, разведенная сыворотка и разведенные контроли.
4.Осторожно перемешать флакон с антигеном и добавить 1 каплю (50 мкл) соответствующей суспензии (примечание 6) в каждую пробирку. Тщательно перемешать.
5.Инкубировать пробирки при 37° С в течение 24 часов (примечание 7).
СЧИТЫВАНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
А. АГГЛЮТИНАЦИЯ НА СЛАЙДАХ
Осмотреть макроскопически наличие или отсутствие агглютинатов в течение 1 минуты после перенесения слайда из ротатора, сравнивая полученные результаты с контрольными сыворотками.
Brucella Rose Bengal может быть тестирована немедленно. Агглютинация появляется при наличие содержания антител ? 25 МЕ/мл.
Положительную сыворотку следует раститровать аналогично агглютинации в пробирках.
В. АГГЛЮТИНАЦИЯ В ПРОБИРКАХ
Осмотреть макроскопически образцы агглютинации (примечание 8) и сравнить результаты с подобными результатами, полученными при исследовании контрольных образцов.
Отрицательный Контроль и физиологический раствор не дают видимой агглютинации. В пробирке с Положительным Контролем можно увидеть частичную или полную агглютинацию.
Частичная или полная агглютинация с разной степенью прозрачности супернатанта оценивается как положительный результат.
Титр сыворотки, определяющийся как высокое разведение, указывает на положительный результат.
Титр больше, чем 1/80 – 1/160 обычно определяется как положительный результат.
Единичные результаты не являются диагностически значимыми, при условии необычайно высокого тира.
Большинство заключительных лабораторных данных требуют повышенного внимания при наличие повышенного титра (>2-кратного) между последовательными образцами сыворотки.
ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ
Ложно отрицательные результаты могут быть на раннем этапе заболевания, в случае иммунодепрессии, прозоны (Бруцеллез) и лечения антибиотиками.
Ложно отрицательные соматические (О) тесты могут быть обнаружены у тифоидных больных пролеченных хлорамфениколом.
Серологическая кросс-реакция с Бруцеллой возникает в случае инфекций или вакцинаций некоторыми штаммами Vibrio cholerae, Pateurella, Proteus OX19 и Y. Enterocolitica (серотип 9).
Высокий процент здоровых индивидуумов содержит пониженные титры антигена Протея, особенно при агглютинации на слайдах. Титры менее, чем 1/160 (пробирки) не рассматриваются как значительные.
ПРИМЕЧАНИЯ
1.Чувствительность теста может быть снижена при уменьшении температуры. Большие результаты наблюдаются при снижении температуры более, чем на 10° С.
2.Когда определяются антитела на Brucella, рекомендуется уменьшать объем образца до 0,02 мл для предотвращения прозоны.
3.В некоторых географических ареалах с высоким превалированием фебрильных антител, рекомендуется разводить сыворотку и физиологическим раствором. перед постановкой проб.
4.Контроли предназначаются для оценки результатов в положительных и отрицательных образцах.
5.Задержка в считывании результатов может приводить к ложно положительным результатам.
6.Использование Rose Bengal антигена является строго ограниченным для определения антител анти-бруцелла (abortus, melitensis, suis) методом определения агглютинации на слайдах. Пробирочное тестирование охватывает тестирование B.abortus (код 33309) или B. melitensis (код 33314), в серийных достаточно больших разведениях (10 пробирок) для покрытия эффекта прозоны.
7.Процедура инкубации должна происходить следующим образом:
Соматические (О) и Proteus антигены: 48 – 50 С в течение 4 часов
Флагеллярные (Н) антигены: 48 – 50 С в течение 2 часов.
8.Соматическая (О) реакция характеризуется грубой, компактной агглютинацией, склонную к трудной дисперсии, хотя флагеллярные (Н) имеют широкие характеристики, флоккулянтную агглютинацию.
